På grunn av det sjette rot-forholdet til Förster-avstanden, gir en variasjon i o

På grunn av det sjette rot-forholdet til Förster-avstanden, gir en variasjon i orienteringsfaktoren fra 1 til 4 bare 26 prosent endring i den beregnede avstanden, og en maksimal feil på 35 prosent er mulig når den vanligvis antatte verdien på 0,67 er anvendt. Den alvorligste potensielle feilen oppstår hvis dipolene er orientert i hvert fall vinkelrett på hverandre og den tilsvarende κ-kvadratiske verdien blir lik null. Flere teknikker for å håndtere usikkerheten har blitt benyttet, inkludert antakelsen om at det eksisterer en rekke statiske orienteringer og ikke endrer seg i løpet av fluoroforens eksistente tilstand. Målinger av fluorescensanisotropi for donor og akseptor kan tillate grenser å bestemmes for κ-kvadratisk variasjon. Like måte,bruk av fluoroforer med lav fluorescenspolarisering (på grunn av utslipp fra flere overlappende overganger) reduserer usikkerheten i orienteringsfaktoren. Begrensning av mulige verdier for κ-kvadrat på denne måten reduserer den potensielle avstandsberegningsfeilen til kanskje 10 prosent.

Bilde 079A | Jablonski-diagram av FRET med typiske tidsangivelser angitt. Merk at den svarte stiplede linjen indikerer en virtuell foton. | Attribution-ShareAlike 3.0 Unported (CC BY-SA 3.0) | Page URL : (https://en.wikipedia.org/wiki/File:FRET_Jablonski_diagram.svg) fra Wikimedia Commons

Forfatter : Yavor Mendel

Referanser:

Molekylærbiologiteknikker I

Teknikker for molekylærbiologi III