En av de mest grunnleggende teknikkene for molekylærbiologi for å studere proteintjeneste er molekylær kloning. I denne teknikken klones DNA som koder for et protein av interesse, ved bruk av polymerasekjedereaksjon( PCR) og / eller begrensningsenzymer til et plasmid (ekspresjonsvektor). En vektor har tre karakteristiske trekk: et replikasjonssted, et multiploningskloningssted( MCS) og en selektiv markør som vanligvis er antibiotikaresistens. Lokalisert oppstrøms for det multiple kloningssete er promoterregionene og kopieringsstartstedet som regulerer ekspresjonsformen for klonet gen. Dette plasmidet kan settes inn i enten bakterie- eller dyreceller. Introduksjon av DNA i bakterieceller kan gjøres ved transformasjon via opptak av naken DNA, conjugation via celle-cellekontakt eller ved transduksjon via viral vektor. Å introdusere DNA i eukaryote celler, som vist av dyreceller, ved fysiske eller kjemiske midler kalles transfection. Flere unike transfection teknikker er tilgjengelige, som vist med kalsiumfosfat transfection, elektroporering, mikroinjeksjon og liposom transfection. Plasmidet kan være integrert i genomet, noe som resulterer i et stabilt transfection, eller kan forbli uavhengig av genomet, kalt forbigående transfection .
Bilde 095A | Skjematisk forhold mellom biokjemi, genetikk og molekylærbiologi Ingen maskinlesbar forfatter gitt. OldakQuill antatt (basert på krav om opphavsrett). (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Schematic_relationship_between_biochemistry,_genetics_and_molecular_biology.svg), "Schematisk forhold mellom biokjemi, genetikk og molekylærbiologi", https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/ legal code fra Wikimedia Commons
Forfatter : John Kaisermann
Kommentarer
Legg inn en kommentar