Tradisjonelt var homologous rekombinasjon den viktigste handlingen for å forårsake et gen knockout. Denne handlingen innebærer å lage en DNA -konstruksjon som inneholder den ønskede mutasjonen. For knockout -formål innebærer dette vanligvis en medikamentresistensmarkør i stedet det ønskede knockout -genet. Konstruksjonen vil dessuten inneholde minimum 2 kb homologi til den objektive sammenkjøring. Konstruksjonen kan leveres til stamceller enten gjennom mikroinjeksjon eller elektroporering. Denne handlingen er deretter avhengig av cellens egne reparasjonsmekanismer for å rekombinere DNA -konstruksjonen til den eksisterende DNA. Dette resulterer i at sammenføyningen av genet blir endret, og i de fleste tilfeller vil genet bli oversatt til et ikke-funksjonelt protein, hvis det i det hele tatt er oversatt. Dette er imidlertid en ineffektiv handling, da homologous rekombinasjon bare utgjør 10 −2til 10 -3av DNA integrasjoner. Ofte blir medisinutvelgelsesmarkøren på konstruksjonen brukt til å velge for celler der rekombinasjonshendelsen har skjedd.
Bilde 200A | Fagterapi er et godt alternativ til bruk av antibiotika, men noen bakterier har CRISPR-Cas-systemer. Selv om fager hadde Acr-proteiner, ville de hemme CRISPR-Cas-immunsystemet og infisere cellen. På slutten av fagenes reproduksjonssyklus, som finner sted inne i bakterier, vil nye fag bli frigitt, noe som provoserer cellelysen. | BQUB19-JGreoles / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Anti-Crispr_Phage_Therapy.jpg) from Wikimedia Commons
Forfatter : John Kaisermann
Kommentarer
Legg inn en kommentar