Eksempel: bakterieplasmid subcloning

I dette eksemplet blir et gen fra pattedyrgenbibliotek subklonet til et bakterieplasmid (destinasjonsplattform). Bakterieplasmidet er et sirkulært stykke DNA som inneholder regulatoriske elementer som gjør det mulig for bakteriene å produsere et genprodukt (genuttrykk) hvis det plasseres på riktig sted i plasmidet. Produksjonsstedet er flankert av to skjæringssteder "A" og "B" med begrensende ender.

Pattedyret DNA kommer ikke med disse begrensningsstedene, så de er innebygd ved overlappende forlengelse PCR. Primerne er designet for å sette begrensningssidene nøye, slik at kodingen av proteinet er i rammen, og et minimum av ekstra aminosyrer blir implantert på hver side av proteinet.

Både PCR -produktet som inneholder pattedyrgenet med de nye begrensningsstedene og destinasjonsplasmidet blir utsatt for begrensningsfordøyelse, og fordøyelsesproduktene blir renset ved gel electrophoresis .

Bilde 274A | Dette bildet viser forløpet til subcloning som skissert til venstre. | Den opprinnelige opplasteren var Takometer på engelsk Wikipedia. / Attribution 2.5 Generic | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Subcloning.png) from Wikimedia Commons

Forfatter : Yavor Mendel

Referanser:

Molekylærbiologiteknikker II

Teknikker for molekylærbiologi VI