Dette for hånden bruker reversible terminatorbundne dNTP-er i en syklisk operasjon som omfatter nukleotidinkorporering, fluorescensavbildning og spaltning. En fluorescerende merket terminator avbildes når hver dNTP tilsettes og deretter spaltes for å tillate inkorporering av den neste basen. kjemisk blokkert slik at hver inkorporering er en unik hendelse. Et avbildningstrinn følger hvert basisinkorporasjonstrinn, deretter fjernes den blokkerte gruppen kjemisk for å forberede hver streng for neste inkorporering ved DNA polymerase. Denne rekkefølgen av rekkefølgen av trinn fortsetter for et spesifikt antall sykluser, bestemt av brukerdefinerte instrumentinnstillinger. 3'-blokkeringsgruppene ble opprinnelig tenkt som enten enzymatisk eller kjemisk reversering. Den kjemiske operasjonen har vært grunnlaget for Solexa- og Illumina-maskinene. Utligning med reversibel terminatorkjemi kan være en firfargesyklus som vist ved bruk av Illumina / Solexa, eller en enfargesyklus som vist av brukt av Helicos BioSciences. Helicos BioSciences brukte "virtuelle terminatorer", som er ublokkerte terminatorer med en andre nukleosidanalog som fungerer som en hemmer. Disse terminatorene har passende modifikasjoner for å avslutte eller hemme grupper slik at DNA syntese avsluttes etter en enkelt basetilsetning.
Bilde 155A | PacBio SMRT-teknologi og Oxford Nanopore kan bruke uforandret DNA for å møte metylering. | Nivretta Thatra / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:3rd_gen_Epigenetics.png) fra Wikimedia Commons
Forfatter : Yavor Mendel
Kommentarer
Legg inn en kommentar